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金黃色葡萄球菌
人類的一種重要病原菌
簡介
金黃色葡萄球菌
新出現(xiàn)的耐甲氧西林金黃色葡萄球菌，被稱作超級細(xì)菌，幾乎能抵抗人類所有的藥物，但是萬古霉素可以對付它。典型的金黃色葡萄球菌為球型，直徑0.8μm左右，顯微鏡下排列成葡萄串狀。金黃色葡萄球菌無芽胞、鞭毛，大多數(shù)無莢膜，革蘭氏染色陽性。金黃色葡萄球菌營養(yǎng)要求不高，在普通培養(yǎng)基上生長良好，需氧或兼性厭氧，最適生長溫度37°C，最適金黃色葡萄球菌普通培養(yǎng)基培養(yǎng)特點(diǎn)生長pH7.4，干燥環(huán)境下可存活數(shù)周。平板上菌落厚、有光澤、圓形凸起，直徑0.5~1.0mm。血平板菌落周圍形成透明的溶血環(huán)。金黃色葡萄球菌有高度的耐鹽性，可在10~15%NaCl肉湯中生長。可分解葡萄糖、麥芽糖、乳糖、蔗糖，產(chǎn)酸不產(chǎn)氣。甲基紅反應(yīng)陽性，VP反應(yīng)弱陽性。許多菌株可分解精氨酸，水解尿素，還原硝酸鹽，液化明膠。金黃色葡萄球菌具有較強(qiáng)的抵抗力，對磺胺類藥物、青霉素、紅霉素、土霉素、新霉素等抗生素敏感，但易產(chǎn)生耐藥性，原因是由于這些菌株產(chǎn)生青霉素酶等。對堿性染料敏感，十萬分之一的龍膽紫液即可抑制生長。
金黃色葡萄球菌是常見的食源性致病菌，廣泛存在于自然環(huán)境中。金黃色葡萄球菌在適當(dāng)?shù)臈l件下，能夠產(chǎn)生腸毒素，引起食物中毒。近幾年，金黃色葡萄球菌引發(fā)的食物中毒報道層出不窮，由金黃色葡萄球菌引起的食物中毒占食源性微生物食物中毒事件的25%左右，金黃色葡萄球菌成為僅次于沙門氏菌和副溶血桿菌的第三大微生物致病菌。
金黃色葡萄球菌對高溫有一定的耐受能力，在80℃以上的高溫環(huán)境下30min才可以將其徹底殺死，另外金黃色葡萄球菌可以存活于高鹽環(huán)境，最高可以耐受15%濃度的NaCl溶液。由于細(xì)菌本身結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，利用70%的乙醇可以在幾分鐘之內(nèi)將其快速殺死。金黃色葡萄球菌代謝類型為需氧或兼性厭氧，對環(huán)境要求不高，37℃為最適生長溫度，能在各種惡劣環(huán)境中存活下來，因此，用一般的營養(yǎng)瓊脂即可正常培養(yǎng)細(xì)菌。
流行病學(xué)
金黃色葡萄球菌
金黃色葡萄球菌的流行病學(xué)一般有如下特點(diǎn)：季節(jié)分布，多見于春夏季；中毒食品種類多，如奶、肉、蛋、魚及其制品。此外，剩飯、油煎蛋、糯米糕及涼粉等引起的中毒事件也有報道。上呼吸道感染患者鼻腔帶菌率83%，所以人畜化膿性感染部位，常成為污染源。
金黃色葡萄球菌是人類化膿感染中最常見的病原菌，可引起局部化膿感染，也可引起肺炎、偽膜性腸炎、心包炎等，甚至敗血癥、膿毒癥等全身感染。金黃色葡萄球菌的致病力強(qiáng)弱主要取決于其產(chǎn)生的毒素和侵襲性酶：
a.溶血毒素：外毒素，分α、β、γ、δ四種，能損傷血小板，破壞溶酶體，引起肌體局部缺血和壞死。
e.腸毒素：金黃色葡萄球菌能產(chǎn)生數(shù)種引起急性胃腸炎的蛋白質(zhì)性腸毒素，分為A、B、C1、C2、C3、D、E及F八種血清型。腸毒素可耐受100°C煮沸30分鐘而不被破壞。它引起的食物中毒癥狀是嘔吐和腹瀉。此外，金黃色葡萄球菌還產(chǎn)生溶表皮素、明膠酶、蛋白酶、脂肪酶、肽酶等。
f.表皮剝脫毒素：引起燙傷樣皮膚綜合征，又稱剝脫樣皮炎。
g.毒性休克綜合征毒素（tsst-1）腸毒素是一種單鏈小分子蛋白，分子量約26-29kDa，相對分子質(zhì)量較低，具有熱穩(wěn)定性，對人體腸道產(chǎn)生破壞，導(dǎo)致嘔吐腹瀉等癥狀。目前研究已發(fā)現(xiàn)多種類型的腸毒素或類腸毒素，除傳統(tǒng)腸毒素A(SEA)、B(SEB)、C(SEC)、D(SED)、E(SEE)之外，SEG、SEH、SEI、SEJ、SEK、SEL、SEM、SEN、SEO、SEP、SEQ、SER、SEU和SEV等腸毒素也不斷被發(fā)現(xiàn)。
引發(fā)病癥
金黃色葡萄球菌
球菌檢驗(yàn)
金黃色葡萄球菌
增菌培養(yǎng)：將10-1稀釋液接入7.5%NaCl肉湯或胰蛋白胨肉湯中，37°C培養(yǎng)24小時。
分離培養(yǎng)：將上述稀釋液或培養(yǎng)液分別劃線血平板和Baird-Parker平板，置37°C培養(yǎng)24~48小時。金黃色葡萄球菌在血平板上呈金黃或白色菌落，大而凸起，表面光滑，周圍有溶血圈。在Baird-Parker平板上菌落為圓形，直徑2~3mm，顏色灰或黑色，周圍有一渾濁帶。
染色觀察：從平板上挑取可疑性菌落進(jìn)行革蘭氏染色，金黃色葡萄球菌為革蘭氏陽性，顯微鏡下呈葡萄狀排列無芽胞、莢膜，直徑0.5~1μm。
血漿凝固酶試驗(yàn)：吸取0.5mL兔血漿與0.5mL金黃色葡萄球菌試液浸液肉湯24小時培養(yǎng)物充分混勻，置36±1°C培養(yǎng)，每隔半小時觀察一次，連續(xù)觀察6小時，出現(xiàn)凝固，即將小試管傾斜或倒置時，內(nèi)容物不流動，判為陽性。同時做陰陽性對照。耐熱核酸酶試驗(yàn)：將24小時肉湯培養(yǎng)物沸水浴處理15min，用接種環(huán)劃線刺種于甲苯胺蘭-DNA平板，36±1°C培養(yǎng)24小時，在刺種線周圍出現(xiàn)淡粉色者為陽性。本試驗(yàn)金黃色葡萄球菌為陽性。
第二，金黃色葡萄球菌腸毒素檢測
金黃色葡萄球菌腸毒素的檢測主要有動物試驗(yàn)、血清學(xué)試驗(yàn)、免疫熒光試驗(yàn)及酶聯(lián)免疫吸附等方法，在此就不一一贅述。
防控措施
1.合理選擇食品原料和配料，使用安全的水和食物原料，改善加工環(huán)境的衛(wèi)生和操作者的個人衛(wèi)生習(xí)慣，避免金黃色葡萄球菌對食品的污染。
2.牢記在安全的溫度下保存食物，生熟分開，建議食物應(yīng)該現(xiàn)做現(xiàn)吃。盡可能采取熱處理確保殺滅細(xì)菌，熱處理后避免二次污染。
3.對已感染或攜帶某種病原體的食品加工人員，應(yīng)依據(jù)有關(guān)法律法規(guī)，限制其從事食品加工活動。
4.生產(chǎn)加工乳制品、肉類等高危食品的企業(yè)，應(yīng)認(rèn)真、嚴(yán)格的執(zhí)行食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)的相關(guān)規(guī)定。在加工過程中或在市場流通中發(fā)現(xiàn)產(chǎn)品檢驗(yàn)的某些指標(biāo)不符合食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)，應(yīng)以消費(fèi)者利益為重，自覺把控出廠產(chǎn)品的質(zhì)量、主動召回不合格產(chǎn)品，防范引起中毒事件的潛在風(fēng)險。
5.政府相關(guān)部門要加強(qiáng)我國食品中金黃色葡萄球菌安全的風(fēng)險識別和風(fēng)險評估研究工作。重視并持續(xù)開展預(yù)防和控制食源性疾病的宣傳教育，及時提醒消費(fèi)者一旦發(fā)生疑似金黃色葡萄球菌腸毒素中毒，除立即將患者送往醫(yī)院進(jìn)行救治外，還要立即停止食用并封存可疑食品。同時對食品生產(chǎn)、加工、經(jīng)營人員，普及預(yù)防食源性疾病的衛(wèi)生學(xué)知識。
感染處理
限量標(biāo)準(zhǔn)
我國國家衛(wèi)生和計劃生育委員會于2013年發(fā)布《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品中致病菌限量》(GB29921-2013)，在國標(biāo)中制定了金黃色葡萄球菌的限量標(biāo)準(zhǔn)，規(guī)定熟肉制品、熟制水產(chǎn)品、熟制糧食制品等8大類食品中，同批次采集5份樣品，每份樣品中的金黃色葡萄球菌濃度均不得超出1000CFU/g，僅允許其中1份樣品在100~1000CFU/g之間。
傳播途徑
一般來說，金黃色葡萄球菌可通過以下途徑污染食品：食品加工人員、炊事員或銷售人員帶菌，造成食品污染；食品在加工前本身帶菌，或在加工過程中受到了污染，產(chǎn)生了腸毒素，引起食物中毒；熟食制品包裝不嚴(yán)，運(yùn)輸過程受到污染；奶牛患化膿性乳腺炎或禽畜局部化膿時，對肉體其他部位的污染。
培養(yǎng)方式
檢測方法
傳統(tǒng)分離鑒定方法
世界上對食品中金黃色葡萄球菌的檢測通常采用生化鑒定的手段，并在初期采用平板劃線分離。當(dāng)前我國檢測食品中金黃色葡萄球菌依據(jù)國家標(biāo)準(zhǔn)《食品微生物學(xué)檢驗(yàn)金黃色葡萄球菌檢驗(yàn)》(GB4789.10-2016)中的方法進(jìn)行。國家標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行內(nèi)容包括定性檢測和定量檢測兩部分。在無菌條件下接種到肉湯中進(jìn)行前增菌，最后將培養(yǎng)物接種劃線，根據(jù)生化鑒定方法進(jìn)行血清學(xué)鑒定。傳統(tǒng)生化鑒定方法操作簡單，穩(wěn)定性強(qiáng)，成本低，是目前最常用的鑒定方法。
免疫學(xué)檢測方法
免疫學(xué)檢測方法主要是基于免疫學(xué)理論研究，其是通過設(shè)計的抗原、抗體和免疫細(xì)胞，檢測抗原和抗體的結(jié)合以及免疫細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子的，從而達(dá)到檢測目的一種實(shí)驗(yàn)方法。該技術(shù)方法主要包括酶聯(lián)免疫法、免疫熒光法、免疫膠體金法等。
①酶聯(lián)免疫法：其原理是利用抗體與抗原在載體表面的特異性結(jié)合，加入某種酶，酶與抗體或抗原結(jié)合在一起，從而形成可以跟蹤抗體或抗原的標(biāo)記物，由于抗原或抗體與受檢樣品的反應(yīng)產(chǎn)生抗原或抗體的復(fù)合物，此時加入酶反應(yīng)顯色底物，產(chǎn)物的量的大小與檢測物質(zhì)的量的大小呈正相關(guān)，分析顯色情況從而確定樣品中待檢測物的含量。目前已經(jīng)開發(fā)了幾種根據(jù)ELISA技術(shù)用于檢測培養(yǎng)上清液和食物樣品(例如干酪，土豆沙拉，火腿和牛奶)中的金黃色葡萄球菌。
②免疫熒光法：免疫熒光技術(shù)利用熒光色素對抗體或抗原進(jìn)行標(biāo)記，然后檢測目標(biāo)抗原或抗體。抗原和抗體特異結(jié)合后，通過考察熒光信號的強(qiáng)弱進(jìn)行定性定量檢測。與酶介導(dǎo)的免疫測定相比，基于熒光的免疫測定具有提供高通量分析和靈敏度的更大潛力。
③免疫膠體金法：該方法借助硝酸纖維膜為固定相載體，樣品溶液通過毛細(xì)作用在試紙條中移動，在試紙條中同時加入了針對待檢測物質(zhì)特異性的抗原或抗體。與ELISA技術(shù)相比，免疫膠體金技術(shù)操作更為簡單，對實(shí)驗(yàn)人員沒有特別的技術(shù)要求，適合基層單位和現(xiàn)場診斷。但是免疫膠體金相比較ELISA法而言，靈敏度更低，且使用范圍不廣，需要進(jìn)一步的研究。總體而言，免疫膠體金有著強(qiáng)大的發(fā)展?jié)摿蛷V闊的應(yīng)用前景。
分子生物學(xué)檢測方法
該技術(shù)主要包括聚合酶鏈反應(yīng)（PolymeraseChainReaction，PCR）技術(shù)，核酸探針技術(shù)，環(huán)介導(dǎo)等溫擴(kuò)增技術(shù)等技術(shù)。
①聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)：該方法的原理是在DNA聚合酶的作用下，游離的脫氧核糖核酸參照堿基互補(bǔ)配對的原則，以模板DNA為主鏈，通過提供一段引物，迅速的擴(kuò)增DNA的雙螺旋結(jié)構(gòu)。PCR技術(shù)特異性強(qiáng)、敏感度高，已廣泛應(yīng)用于醫(yī)學(xué)、生物學(xué)等領(lǐng)域中。PCR作為致病微生物的檢測方法，穩(wěn)定性強(qiáng)，是目前主流的檢測方法。在微生物檢測應(yīng)用中，引物的設(shè)計以及靶序列的選擇是PCR方法的核心。PCR法同時也有一定的局限性，由于該方法需要對樣品進(jìn)行增菌，食品成分復(fù)雜，會對實(shí)驗(yàn)造成干擾。與其他方法相比，PCR技術(shù)儀器設(shè)備價格高，需要花費(fèi)的成本較高，推廣普及需要一定的時間和資金支持。
②核酸探針技術(shù)：通過使用基因特異性核苷酸序列作為探針與目的DNA雜交的一種核酸雜交技術(shù)，通過檢測該段特異性的標(biāo)記物，從而判斷是否含有目標(biāo)微生物。核酸探針具有分子生物學(xué)檢測技術(shù)的靈敏度高、特異性強(qiáng)的優(yōu)點(diǎn)，但是實(shí)驗(yàn)周期長，操作繁瑣，如果樣品中目標(biāo)微生物含量過低，極易造成樣品目標(biāo)微生物未檢出，出現(xiàn)假陰性的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
③環(huán)介導(dǎo)等溫擴(kuò)增技術(shù)：該技術(shù)基于DNA擴(kuò)增技術(shù)，能夠在恒溫條件下，根據(jù)設(shè)計的多對引物，利用鏈置換型DNA聚合酶快速的進(jìn)行核酸的擴(kuò)增。與PCR方法比較，環(huán)介導(dǎo)等溫擴(kuò)增法操作更加快捷簡單，花費(fèi)成本較低，且對儀器要求低，能夠廣泛利用在食源性致病微生物的檢測中。
其他方法
試劑盒法：試劑盒法通常將十多種，甚至幾十種培養(yǎng)基或成分集中在特定微型裝置內(nèi)，通過觀察微生物的生長和代謝過程的某些產(chǎn)物或現(xiàn)象，對試驗(yàn)現(xiàn)象進(jìn)行分析，將傳統(tǒng)試驗(yàn)中多次試驗(yàn)通過一次完成，縮短了檢測時間。此法可大大縮短測試時間，在24h內(nèi)得出結(jié)果，甚至某些可縮短至4h內(nèi)。目前，用于檢測金黃色葡萄球菌的成品試劑盒有API、MIS等。
測試片法：其將紙膜、紙片或膠片附著相關(guān)培養(yǎng)基和特定顯色液作為金葡菌的培養(yǎng)載體，依據(jù)金葡菌在載體上的生長以及顯色情況，來衡量食品中金黃色葡萄球菌的存在數(shù)量，該方法簡便易行，但結(jié)果精度不高。
參考資料
[1]
金黃色葡萄球菌性邊緣性角膜炎的檢查項目有哪些？[引用日期2015-09-04]
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